病毒DNA/RNA提取試劑盒
- 產品品牌：???凱杰
- 產品貨號：???
- 產品規格：???250T/盒
- 檢測方法：???
病毒DNA/RNA提取試劑盒
QIAampR UltraSensTM Virus Handbook
廣州健侖生物科技有限公司
（用于從1ml懸液樣品中高效純化可濾性病毒RNA或DNA）
1 試劑盒（250份）
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純化柱 |
250 |
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接收管 2ml |
750 |
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AC 緩沖液 |
230 ml |
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AR* 緩沖液 |
90 ml |
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AB 緩沖液(濃縮) |
22 ml |
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AW1* 緩沖液(濃縮) |
95 ml |
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AW2* 緩沖液(濃縮) |
66 ml |
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AVE 緩沖液 |
10×2 ml |
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蛋白酶K |
6 ml |
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Carrier RNA |
5×310 μg |
2 保存
2.1 純化柱室溫保存（15—25 ℃，以下室溫保存均指該溫度），保質期12個月
2.2干粉狀Carrier RNA 可室溫保存1年；而溶于AVE緩沖液時需要等分，可于-20℃保存1年
2.3 蛋白酶溶液可室溫保存1年，但于2—8℃環境下可延長保存期
3 安全
3.1 衣著：合適的實驗室外套、一次性醫用手套、護目鏡
3.2 注意事項
3.2.1 勿將漂白劑或酸溶液直接加入樣品準備廢液中，當AR緩沖液和AW1緩沖液含有的胍氫可酮和漂白劑結合時會產生高敏性的有害混合物
3.2.2 緩沖液AC、AB、AR、AW1和蛋白酶K均具潛在危險性，操作時需認真謹慎
3.2.3 所有實驗步驟均需在室溫（15—25℃）下進行；樣品液可于2—8℃下保存6小時，在-20℃或-80℃下保存更長時間；同時，樣品需先用內部控制物處理，以防核酸酶降解
3.2.4 純化柱（防交叉污染）
3.2.4.1 加入樣品液時勿弄濕柱子邊緣
3.2.4.2 注意更換有屏障的無核酸酶槍頭
3.2.4.3 防止用槍頭觸碰柱膜
3.2.4.4 稍離心除去蓋上液滴
4、設備與試劑
4.1 乙醇（96—100%）
4.2 無菌、無核酸酶、有屏蔽的槍頭
4.3 無核酸酶離心管（1.5ml和2ml）
4.4 一次性無粉手套
4.5 磷酸鹽緩沖液（PBS,當樣品樣不足1ml時）
4.6 可調速微型離心機（250—1200×g）
4.7 振搖孵育器，可加熱
4.8試劑準備
4.8.1 Carrier RNA
每管加入310μl緩沖液AVE，制成1μg/μl 溶液，-20℃保存（凍融不能超過3次），每樣品最優Carrier RNA量為5.6μg
4.8.2 緩沖液AB
加入標明的乙醇體積（96—100%），翻轉10次，使得溶液均質，室溫保存
4.8.3 緩沖液AW1*
加入瓶上標明的乙醇體積（96—100%），室溫保存
4.8.4 緩沖液AW2*
加入瓶上標明的乙醇體積（96—100%），室溫保存
5、流程
5.1 1ml處理液
5.2 細胞溶解，目標物沉淀于緩沖液AC中
5.3 在緩沖液AR中重新懸浮，并用蛋白酶K除去蛋白
5.4 加入緩沖液AB，連接，清洗2遍，洗提獲得RNA或DNA
6、實驗操作步驟
6.1 準備
6.1.1 使樣品液溫度平衡至室溫（15—25℃）
6.1.2 校核緩沖液AB、AW1、AW2、Carrier RNA等
6.1.3 使AR緩沖液溫度平衡至60℃（水浴鍋）
6.1.4 所有離心操作需在室溫下進行
6.2 吸取1ml 樣液至2ml 離心管中（管蓋上不能有液體粘附，防污染）
若不足1ml，需用磷酸鹽緩沖液補足，但樣液體積應不少于200μl
6.3 吸取0.8ml 緩沖液AC至樣液表面；吸取5.6μl Carrier RNA液體至管蓋（6.1μl mix）勿將緩沖液AC和Carrier RNA事先混合，且需加入內部控制物，同時推薦與Carrier RNA混合加入（0.5μl + 5.6μl Carrier RNA），即6.1μl mix
6.4 蓋上蓋子，上下翻轉3次，渦旋10秒
6.5 室溫孵育10分鐘（最多15分鐘，不能更久）
6.6 離心3分鐘（1200×g），移除表面液體，收集沉淀（輕彈使沉淀松散，確保蓋上無碎物）
6.7 移入300μl 預熱至60℃的緩沖液AR和20μl 蛋白酶K
為了減少移液步驟，可將緩沖液與蛋白酶K混合，若10份，即3.3ml預熱緩沖液AR和220μl蛋白酶（多10%），漩渦10秒混合后，分裝320μl至每管
6.8漩渦至微粒完全重新懸浮
每次漩渦兩管（5—10秒），后漩渦另兩管，反復循環3—5次（或更多），有助于蛋白消化
6.9 在振搖孵育器上孵育10分鐘，40℃，最高混勻速度
10分鐘已足夠長，不允許延長時間
6.10 稍離心，除去蓋上液滴
6.11 移入300μl 緩沖液AB，漩渦混勻，稍離心
6.12 小心移取700μl溶解物至純化柱（裝在一2ml收集管上），勿弄濕邊緣，蓋上蓋子，離心1分鐘（3000—5000×g）
6.13 將純化柱裝在新的2ml收集管上（試劑盒中提供），遺棄舊收集管；小心打開純化柱蓋子，移入500μl緩沖液AW1；離心1分鐘（6000×g）
6.14 將純化柱裝在新的2ml收集管上（試劑盒中提供），遺棄舊收集管；小心打開純化柱蓋子，移入500μl緩沖液AW2；最高速離心3分鐘（20,000×g）
為防止離心減速震動導致的濾液黏著在純化柱上，可額外取一新2ml收集管套上純化柱，最高速離心1min
6.15將純化柱裝在新的1.5ml收集管上（非試劑盒中提供）遺棄舊收集管；小心打開純化柱蓋子，移入30μl緩沖液AVE至純化柱膜上（全部弄濕），離心1分鐘（6000×g）
6.16 重復步驟6.15，當需更多體積時，可適當增加AVE體積，而非提取后稀釋
6.17 RNA保存，-80℃
備注：初步計算，整個實驗過程共需約2—3小時
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